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基礎(chǔ)毒性研究的染毒途徑和方式

基礎(chǔ)毒性研究,不論是急性、亞慢性與慢性毒性研究,主要是經(jīng)口、經(jīng)皮膚及經(jīng)呼吸道吸入及細(xì)胞暴露等四種染毒途徑。

經(jīng)口染毒
① 灌胃 人工給實驗動物灌入外源化學(xué)物是經(jīng)常使用的經(jīng)口染毒方法。此時外源化學(xué)物直接灌入胃內(nèi),而不與口腔及食道接觸,故而給予的化學(xué)物劑量準(zhǔn)確。但是,當(dāng)待測化學(xué)物為氣態(tài)或固體時均需用某種溶劑溶解,液態(tài)化學(xué)物往往也需用溶劑溶解。
灌胃體積依所用實驗動物而定,小鼠一次灌胃體積在0.1~0.5ml/kg體重,大鼠在1.0ml/100g體重之內(nèi),家兔在5ml/kg體重之內(nèi),狗不超過50ml/10kg體重。
② 喂飼 喂飼方法染毒是將化學(xué)物溶于無害的溶液中拌入飼料或飲用水中,使動物自行攝入含化學(xué)物的飼料或水,然后依每日食入的飼料與水在推算動物實際攝入化學(xué)物的劑量。
喂飼法的優(yōu)點是接觸化學(xué)物的方式符合人類接觸污染食物與水的方式,方法簡便、易操作。但是由于動物(尤其是嚙齒類動物)進(jìn)食時浪費、損失飼料很多,往往攝入的化學(xué)物量不準(zhǔn)確,僅適用于動物數(shù)量較大的毒理學(xué)實驗。如果化學(xué)物有異味,動物可能拒食,如果化學(xué)物在室溫下可以揮發(fā),或在飼料中和水中可以水解,則劑量也不準(zhǔn)確,且有經(jīng)呼吸道與皮膚交叉吸收的可能,喂飼法為了計算每只動物攝入化學(xué)物的劑量,一般要每只動物單籠飼養(yǎng)。由于此種方法更適宜進(jìn)行多日染毒,急性毒性試驗一般不用之。
③ 吞咽膠囊 將所需劑量的受試化學(xué)物裝入藥用膠囊內(nèi),強制放到動物的舌后咽部迫使其咽下。此法劑量準(zhǔn)確,尤其適用于易揮發(fā)、易水解和有異臭的化學(xué)物。兔、貓及狗等較大動物可用此法。

經(jīng)呼吸道染毒
凡是氣態(tài)或易揮發(fā)的液態(tài)化學(xué)物均有經(jīng)呼吸道吸入的可能,在生產(chǎn)過程中形成氣溶膠的化學(xué)物也可經(jīng)呼吸道吸入。經(jīng)呼吸道染毒有兩種類型,一是動物自行吸收,一是人工動物氣管注入。動物自行吸入呼吸道染毒又分靜式吸入染毒與動式吸入染毒兩種方法。
靜式吸入染毒,即在一定容積的染毒柜內(nèi)加入一定量受試物造成含一定濃度受試物的空氣環(huán)境,使受試動物在規(guī)定時間內(nèi), 經(jīng)吸入而達(dá)到染毒,故適用于短時間染毒的試驗使用。
動式吸入染毒,即采用機(jī)械通風(fēng)為動力,連續(xù)不斷地將含有已知濃度受試物的新鮮空氣送入染毒柜內(nèi),并排出等量的污染氣體,使染毒濃度保持相對穩(wěn)定,這樣可使染毒時間不受染毒柜(室)容積的限制,也可避免動物缺氧、二氧化碳積聚、溫度增加等對試驗結(jié)果的可能影響,故適用于較長時間以及反復(fù)染毒的試驗使用。
氣管注入,將液態(tài)或固態(tài)外源化學(xué)物注入肺內(nèi)。這是一個手術(shù)過程,僅適用于制造化學(xué)物對肺臟損傷模型的制備,而不用于一般毒性研究。

經(jīng)皮膚染毒
液態(tài)、氣態(tài)和粉塵狀外源化學(xué)物均有接觸皮膚的機(jī)會。外源化學(xué)物是否能經(jīng)皮膚吸收導(dǎo)致機(jī)體中毒或僅在皮膚局部引起損傷與外源化學(xué)物的性質(zhì)有關(guān)。能經(jīng)皮膚吸收的化學(xué)物主要以擴(kuò)散方式經(jīng)過皮膚角質(zhì)層屏障,在表皮角質(zhì)細(xì)胞的間質(zhì)中充滿非極性的脂類物質(zhì)。脂溶性化學(xué)物主要通過這種途徑滲透入皮膚,所以角質(zhì)層薄的皮膚部位更易吸收。表皮破損、皮膚水化或脫水,以及易于滯留于角質(zhì)層的化學(xué)物,均可增加化學(xué)物的滲透。所以,研究外源化學(xué)物的經(jīng)皮吸收時,皮膚接觸化學(xué)物的面積、時間長短、環(huán)境中溫、濕度均應(yīng)控制統(tǒng)一的條件。再者,年齡老的動物表皮厚度改變、細(xì)胞成分也有變化,所以應(yīng)選擇成年動物為宜。此外,為保證不因皮膚部位不同而形成的化學(xué)物滲透率差異,一般大鼠、豚鼠、兔均使用背部皮膚。面積則依據(jù)選用動物及受試物的劑量和劑型而定。如,家兔可取5cm×6cm、豚鼠取3cm×4cm、大鼠取1.5cm~2.0cm直徑的面積,小鼠取1.0cm~1.5cm直徑的面積。實驗前詳細(xì)檢查去毛部位皮膚有無擦傷、紅腫、皮疹等異常現(xiàn)象,剔除不合格動物。染毒時按單位體重確定給予所需毒劑的容量,故要求配置成相應(yīng)濃度的受試物。接觸時間應(yīng)與人實際接觸該物質(zhì)的時間相仿。但在做功能食品和藥物的毒理學(xué)評價實驗時,一般要求受試物接觸時間適當(dāng)延長,保證對人體不受危害。

離體組織細(xì)胞染毒
近年來隨著染毒裝置的改進(jìn),使得氣體毒性的體外研究成為可能,如CULTEX,使用transwell膜技術(shù),可使細(xì)胞直接暴露于各種氣體如香煙煙霧的環(huán)境中進(jìn)行染毒。細(xì)胞生長在transwell膜上,染毒時膜基底面處于霧化的培養(yǎng)基中,細(xì)胞面暴露于染毒氣體,從而形成一種氣/液交界面,可模擬氣體進(jìn)入體內(nèi)的過程。能使細(xì)胞在常溫和有充分營養(yǎng)的條件下進(jìn)行實驗,在控?zé)煛⒎伟┭芯繗馊苣z對健康影響領(lǐng)域是一個較好的研究工具。

其它途徑染毒
有時需對外源化學(xué)物進(jìn)行絕對毒性或比較毒性研究,或進(jìn)行一些必要的特殊研究(如靜脈注射毒物動力學(xué)、代謝研究、急救藥物篩選等),往往用注射途徑染毒。注射途徑包括靜脈注射(大鼠、小鼠尾靜脈,兔耳緣靜脈)、肌肉注射、皮下注射及小動物腹腔注射染毒。但注射時應(yīng)控制注射體積。

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